کوماسی برلیانت بلو یکی از رنگ هایی است که به طور معمول در آزمایشگاه ها برای پروتکل های رنگ آمیزی پروتئین، پس از الکتروفورز ژل SDS-PAGE یا پلی آکریل آمید استفاده می شود. شیمی رنگ آمیزی این رنگ های پروتئینی بر اساس اتصال آنها با پروتئین و ماتریکس است.
کوماسی برلیانت بلو پتانسیل تشخیص پروتئین های ۳۰-۱۰۰ نانوگرم را دارد. اما حساسیت آن بستگی به نوع رنگ (کوماسی برلیانت بلو G-250 و کوماسی برلیانت بلو R-250) مورد استفاده در روش رنگ آمیزی دارد.
پس از رنگ آمیزی نوارهای آبی با زمینه آبی را مشاهده خواهید کرد. نویز پس زمینه نیز باید کاهش یابد تا تجسم باندها آسان تر شود. این کار با استفاده از محلول رنگ زدایی انجام می شود که تقریباً ۱۰ دقیقه تا یک شب طول می کشد تا رنگ های اضافی از بین برود و نوارهایی با زمینه شفاف ایجاد شود.
برلیانت بلو اولین بار توسط فولکر نوهوف توصیف شد و نام خود را از یک شهر آفریقایی به نام کوماسی گرفت. شما همچنین باید بدانید که نام کوماسی یک علامت تجاری ثبت شده توسط Imperial Chemical Industries است.
این رنگ دارای فرمول شیمیایی C47H50N3NaO7S2 (نمک سدیم) و جرم مولی ۳ گرم بر مول است. به خوبی در آب گرم و اتانول حل می شود اما کمی در آب سرد حل می شود.
فهرست
انواع کوماسی برلیانت بلو
برلیانت بلو بر اساس خواص، ویژگی های مولکولی، توانایی رنگ آمیزی و حساسیت، دو نوع است:
کوماسی برلیانت بلو G-250
برلیانت بلو G-250 (یا کلوئیدال کوماسی بلو) حاوی دو گروه متیل است که در نسخه R-250 رنگ وجود ندارد. G نشان دهنده رنگ مایل به سبز است.
برلیانت بلو به سه شکل کاتیونی (قرمز)، خنثی (به رنگ سبز) و آنیونی (آبی) موجود است. در حضور یک وضعیت اسیدی، رنگ قرمز کوماسی هنگامی که با پروتئین متصل می شود به آبی تبدیل می شود. با این حال، هنگامی که اتصال وجود ندارد، قهوه ای باقی می ماند.
کوماسی برلیانت بلو R-250
برلیانت بلو R-250 شکل دیگری از ترکیب تری فنیل متان دی سولفونه است. R رنگ مایل به قرمز را نشان می دهد. استفاده از محلول رنگ آمیزی تهیه شده با برلیانت بلو R-250 سریع ترین روش برای رنگ آمیزی ژل های پروتئینی پلی آکریل آمید یا مینی ژل های IEF است. این رنگ قیمت کمتری دارد و وضوح بهتری نسبت به رنگ G-250 ارائه می دهد.
کاربردهای کوماسی برلیانت بلو
رنگ آمیزی برلیانت بلو یک تکنیک رنگ آمیزی ژل پروتئینی کارآمد، ساده، سریع و مقرون به صرفه است. می توان آن را به طور معمول در مطالعات مرتبط با پروتئومیکس، مانند طیف سنجی جرمی، SDS-PAGE، وIEF، برای تشخیص تقریباً ۰.۱-۰.۵ میکروگرم پروتئین استفاده کرد. این پروتکل از برلیانت بلو R-250 در محلول متانول/اسید استیک استفاده می کند و پروتئین ها را با تکان دادن ملایم در دمای اتاق رنگ می کند.
یکی دیگر از تکنیک های بسیار حساس برای تجسم پروتئین ها رنگ آمیزی نقره است. با این حال، به دلیل درگیر شدن چندین مرحله و تعدادی محلول، این یک روش دست و پا گیر است.
الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (تهیه شده با اختلاط آکریل آمید و بیس اکریل آمید) تکنیکی برای جداسازی پروتئین ها بر اساس وزن مولکولی آنها برای آزمایش های زیست شناسی مولکولی و آنالیز پروتئین است. پروتئین های جدا شده را می توان با استفاده از روش های برلیانت بلو، فلورسنت یا نقره ای شناسایی کرد.
کوماسی بلو یک روش رنگ آمیزی پروتئین بدون تثبیت، سریع، راحت و کم هزینه است که به راحتی قابل اجرا است. علاوه بر این، این روش در مقایسه با سایر تکنیک های رنگ آمیزی، یک روش سازگارتر با طیف سنجی جرمی (MS) است.